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ABI7500熒光定量PCR儀的使用注意事項(xiàng)
點(diǎn)擊次數(shù):2693 更新時(shí)間:2020-10-15
   一、ABI7500熒光定量PCR儀的使用注意事項(xiàng):
  1、ABI7500熒光定量PCR儀目的條帶很亮,但是邊沿不清楚,前后有拖尾現(xiàn)象。出現(xiàn)這樣的問題,則需要進(jìn)行細(xì)致的分析,因?yàn)橐鹪搯栴}的可能很多。
  2、可先檢查是否模板質(zhì)量問題,如有降解等,模板應(yīng)避免反復(fù)凍融。也有可能是抽提RNA時(shí)有污染,則需要重新抽提RNA。
  3、此外,也可能是非特異性擴(kuò)增引發(fā)該問題,可提高退火溫度,少循環(huán)次數(shù)。電泳緩沖液時(shí)間太長(zhǎng),ph值和鹽離子濃度明顯改變、電泳時(shí)電壓太高、電泳液過久沒換,電泳膠臟了等都可能引發(fā)該問題。
  4、如果不是由上述原因引起,則進(jìn)一步檢查加樣量是否過大,制膠過程中膠孔是否制好,EB是否沖洗干凈、模板中是否混有基因組DNA或蛋白等。也需考慮是否擴(kuò)增的條件不合適。針對(duì)具體原因再采取相應(yīng)的措施。
  5、PCR產(chǎn)物何時(shí)需要用凝膠純化,何時(shí)不需要?當(dāng)凝膠分析擴(kuò)增產(chǎn)物只有一條帶時(shí),則不需要使用凝膠純化。當(dāng)可見其他雜帶時(shí),則可能是積累了大量引物的二聚體,在克隆前需要做凝膠純化。
  6、如果實(shí)驗(yàn)中沒有回收到目的片段,則需要繼續(xù)進(jìn)行對(duì)照實(shí)驗(yàn)。包括涂布未轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞、轉(zhuǎn)化完整質(zhì)粒,計(jì)算菌落生長(zhǎng)數(shù),測(cè)定轉(zhuǎn)化效率、用標(biāo)準(zhǔn)載體,連接對(duì)照,轉(zhuǎn)化高頻率感受態(tài)細(xì)胞,按照的實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行。
  7、實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)假陽性擴(kuò)增該怎么辦?這是擴(kuò)增系統(tǒng)受到污染的表現(xiàn),應(yīng)通過檢查排除污染源。先考慮是否為試劑污染,可將試劑分裝好直接置于PCR儀中擴(kuò)增進(jìn)行判斷。
  8、其次要考慮是否為實(shí)驗(yàn)室污染,可更換所用的移液器、吸咀管(離心管)等,將試驗(yàn)中的關(guān)鍵步驟轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的環(huán)境中,判斷是否為實(shí)驗(yàn)室污染。
  9、如果是則需要對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)室及實(shí)驗(yàn)器材*清洗處理,保持良好的通風(fēng)、清潔等。此外,還要考慮是否為采樣污染,一般表現(xiàn)為一批結(jié)果陽性率很高,一批結(jié)果陽性率又下降很多,如此反復(fù)。解決方法為盡量使用一次試管及吸咀取樣。
  總結(jié):ABI7500熒光定量PCR儀的使用注意事項(xiàng)小編就分享到這了,看完本文您就應(yīng)該有了基本的認(rèn)識(shí)和了解相信大家都明白了吧!總的來說,希望對(duì)大家有所幫助。
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