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熒光定量PCR儀常見的故障解決方法有哪些
點(diǎn)擊次數(shù):779 更新時(shí)間:2023-02-22
  熒光定量PCR儀是一種利用熒光技術(shù)實(shí)現(xiàn)核酸分子擴(kuò)增的儀器,其工作原理可概括為:
  1)檢測DNA樣本:根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求,將DNA樣本加入實(shí)驗(yàn)支架,并置于定溫的PCR儀中進(jìn)行處理。
  2)擴(kuò)增DNA:進(jìn)行PCR循環(huán),即把該DNA樣本通過反轉(zhuǎn)錄酶(RT)從核酸狀態(tài)變成具有特定基因序列的DNA鏈。
  3)檢測基因序列:利用特定的含有熒光探針的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,熒光探針是一種特定結(jié)合到特定基因序列上的分子標(biāo)記,在接觸能夠激發(fā)熒光的激發(fā)劑時(shí),能夠發(fā)出熒光信號。
  4)計(jì)算DNA濃度:通過檢測得到的熒光值可以計(jì)算出該DNA樣本的濃度。
  熒光定量PCR儀常見的故障解決方法有哪些:
  1、探頭檢測不準(zhǔn)確。當(dāng)定量PCR儀檢測到探頭信號不準(zhǔn)確時(shí),可以嘗試使用不同的探頭,或者更換探頭(適當(dāng)減少擴(kuò)增溫度也是一種可能性),以確保精確分析結(jié)果。
  2、儀器讀取不準(zhǔn)確。當(dāng)定量PCR儀讀取數(shù)據(jù)出現(xiàn)異常時(shí),可以檢查儀器設(shè)置,例如查看相關(guān)的靈敏度調(diào)節(jié)參數(shù)并調(diào)整儀器設(shè)置,確保讀取正確的值。
  3、無法正確識別反應(yīng)曲線。在定量PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,反應(yīng)曲線可能會變得不太明顯,此時(shí)可以嘗試使用不同的PCR反應(yīng)體系,比如改變反應(yīng)溫度或使用更高的模板濃度,也可以更換酶以獲得較好的反應(yīng)曲線。
  4、圖形異常。若定量PCR圖形出現(xiàn)異常,則可能是工作液不夠穩(wěn)定或有其它問題,需要重新校準(zhǔn)儀器。
  5、反應(yīng)期產(chǎn)物剩余多。如果發(fā)現(xiàn)反應(yīng)期產(chǎn)物剩余過多,則需要檢查儀器設(shè)置,確保溫度設(shè)置正確。
  6、實(shí)驗(yàn)反應(yīng)效率低。在實(shí)驗(yàn)中可能會發(fā)現(xiàn)反應(yīng)效率較低,這種情況下可能是由于反應(yīng)溫度過高或過低,使產(chǎn)物的活性降低,此時(shí)可以嘗試使用適當(dāng)?shù)臏囟?、模板濃度或酶類型來提高反?yīng)效率,以便獲得較好的結(jié)果。
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